熒光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定， 不但可以做一般的定量分析， 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
 

　　熒光光度計的操作步驟：
 

　　1.開機：接通電源，打開主機開關，點燃(打開)光源后，根據說明書要求啟動計算機。
 

　　2.檢測前準備：參照儀器說明書，在20天內至少進行一次激發(fā)校準和發(fā)射校準，檢測前儀器應預熱。
 

　　3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據樣品的特性及熒光強度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時間等)。
 

　　4.基本測定
 

　　(1)熒光激發(fā)光譜測定
 

　　設置儀器參數，掃描發(fā)射波長，找到maxλem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數，便得到激發(fā)光譜。
 

　　(2)熒光發(fā)射光譜測定
 

　　設置儀器參數，掃描激發(fā)波長，找到maxλex，以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數關系，便得到熒光發(fā)射光譜。
 

　　(3)差譜測定
 

　　設置儀器參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。
 

　　(4)峰面積積分
 

　　選擇適當的工作方式，對樣品溶液進行積分操作，即得到峰面積積分。
 

　　(5)熒光強度
 

　　選擇合適的測量參數，設置λex、λem，采用定點讀數或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強度。
 

　　(6)定量測定
 

　　配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定的測定條件下，設置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。